1. Introduzione

Integrazione dinicotinamide mononucleotide (NMN)per regolamentare illivellodinicotinamide adenina dinucleotide (NAD+)è stato svelato per essere un promettente intervento anti-invecchiamento. Tuttavia, è ancorauna seria sfida per l'accuratezzaquantificare gli intermedi NAD+, NMN soprattutto. Questo studio ha il permesso di introdurre un nuovo metodo, la metodologia LC-MS/MS mediata da doppi isotopi (dimeLC-MS/MS), per la quantificazione precisa diNMN in campioni biologici.

2. Fattori che influenzano l'accuratezza del rilevamento dell'NMN

L'NMN è difficile da rilevare con precisione a causa della sua vulnerabilità agli enzimidegradazione, conversione nell'elaborazione del campione, i suoi comportamenti complessi in diverse condizioni di colonna ed estrazione, nonché l'effetto matrice.


In particolare, l'NMN ha le proprietà di alta polarità e bassa volatilità, che è facile da sciogliere in acqua ma difficile da sciogliere in solventi organici. Queste proprietà limitano notevolmente l'applicazione di molti metodi di analisi quantitativa convenzionali.

Bcampioni iologicicomeil sangue trasporta attività significative di CD38 e CD73 (ecto-5'-nucleotidasi), entrambi i quali potrebbero utilizzare l'NMN come substrato.

Il comportamento dell'NMN nella colonna è molto complesso, probabilmente a causa della natura bipartita delle sue cariche, in modo che sottili differenze nell'estrazione e nelle condizioni della colonna influenzino in modo significativo la rilevazione affidabile e accurata dell'NMN.

3. Strategie di coping didimeLC-MS/MSper ridurre l'impatto dei fattori di impatto

Per evitare l'interferenza dei fattori sopra menzionati, un prototipiacolonnaNMN-2viene applicata. Questa colonnaconteneresParticelle di silice ad alta purezza a base di C18che sono più capaci di legare composti idrofili rispetto alle particelle di carbonio, migliorando la capacità di separazione.

Pacido erclorico (PCA)è impiegato in quanto puòestrarre in modo efficiente il NAD+ e NMN da campioni biologici come il plasma con perdite.

Per regolare gli effetti della matrice, attenersi alla procedura descritta di seguito.unquantità fissa (1 μM) di composto isotopicoioAggiunto abiologicocampioni prima dell'estrazione del PCA.

4. Il vantaggiosdi dimeLC-MS/MS

Ddue standard isotopici NMN, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), nella metodologia guidata da LC-MS/MS, è in grado di tracciare con precisione il destino dell'NMN durante l'elaborazione del campionecheaumenta significativamente l'accuratezza e l'affidabilità della misurazione dell'NMN nei campioni biologici. Inoltre, dimeLC-MS/MS è in grado di valutare l'efficienza di estrazione e le concentrazioni assolute di NMN in diversi tipi di campioni biologici.

5. Conclusione

Esimoènuovo LC-MS/MS-metodologia guidata con doppi standard NMN isotopici potereAccuraA questo punto, l'unicae reliabLymisurare l'NMN in campioni biologici. Può essere utilizzato per studi futuri sull'assunzione di NMN.

6. Riferimento

Unno, Junya et al. "Quantificazione assoluta del mononucleotide di nicotinamide in campioni biologici mediante cromatografia liquida mediata da doppi isotopi-spettrometria di massa tandem (dimeLC-MS/MS)." npj invecchiamento vol. 10,1 2. 2 gennaio 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1

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