Rilevamento della dengue NS1 utilizzando ELISA ultrasensibile con ciclo tio-NAD

1. Introduzione

La febbre dengue è una malattia infettiva acuta causata dallaVirus della dengueattraverso la puntura di una zanzara infetta della specie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus),con i principali sintomi come febbre alta, vertigini, mal di testa, eruzioni cutanee eForte dolori (dolore agli occhi, ai muscoli, alle articolazioni o alle ossa), ecc. Questa malattia è ampiamente diffusa nei climi tropicali e subtropicali. Si stima che ogni anno vengano infettate da 100 a 400 milioni di persone, di cui oltre l'80% è solitamente lieve e asintomatico. Tuttavia, la febbre dengue grave può aumentare il rischio di morte se non trattata adeguatamente. Pertanto, la diagnosi precoce di questa malattia è significativa per il suo trattamento tempestivo.

Da notare che la proteina non strutturale 1 (NS1), una glicoproteina altamente conservata, viene secreta principalmente durante l'infezione daDenguevirus, che è intensamente considerato il principale fattore di patogenesiDengue. Pertanto, l'NSI è generalmente utilizzato come biomarcatore per la diagnosi precoce di questa malattia.

In questo studio, un test di immunoassorbimento enzimatico a sandwich(ELISA) in combinazione con iltio nicotinamide adenina dinucleotide (tio-NAD/S-NAD)metodo ciclistico ( di seguito denominato ELISA ultrasensibile ) viene utilizzato per rilevare l'NSI, seguito dal confronto con NAAT per confermarne l'accuratezza del rilevamento.

2. Vantaggi e svantaggi dei metodi di rilevamento tradizionali perDengue 

Al momento, tEcco quattro metodi di rilevamento principaliper Dengue.


Isolamento virale e l'identificazione hanno un'elevata specificità, ma richiedono molto tempo, impiegando almeno 5 giorni. Le antigene rapido test è il più veloce ed economico tra gli altri metodi, ma la sensibilità e la specificità sono relativamente basse. Il test sierologico basato su IgM e IgG è limitato da il numero di giorni di infezione,Leil test deve essere ritardato fino a quando il livello di anticorpi sale a un livello rilevabile.

In clinica, la NAAT viene spesso applicata per determinareDengue dalla sporcizia della sua elevata sensibilità e specificità. Tuttavia, questo metodo è costoso, laborioso e soggetto a falsi positivi, che devono essere condotti dal personale addestrato.Per superare gli svantaggi di questi metodi, è stato introdotto un nuovo metodo di rilevamentol'ELISA ultrasensibile è applicato in questo studio.

3. Flusso di lavoro dell'ELISA ultrasensibile con ciclo tio-NAD

Una coppia di anticorpièutilizzato per catturare la proteina NS1 nel sandwich ELISA e la fosfatasi alcalinaèmarcato sull'anticorpo secondario. Oltre agli anticorpi, un derivato dell'androsterone, la 3α-idrossisteroide deidrogenasi, il tio-NAD e il NADHsonoutilizzato per costruire il sistema di ciclo enzimatico tio-NAD. Durante la reazione ciclica tio-NAD, il tio-NADH si accumulava costantemente in un numero triangolare e poteva essere misurato direttamente a un'assorbanza di 405 nm.

4. Il confronto tra ELISA e NAAT ultrasensibili nella rilevazione della proteina NS1 della dengue

Nel NAAT, 60 campioni sono positivi alla dengue e 25 sono negativi alla dengue. Il valore della soglia di ciclo NAAT (CT) di questi campioni positivi alla dengue variava da 12,42 a 31,41.Nell'ELISA ultrasensibile, 59 campioni sono corrispondentemente positivi ai risultati NAAT, mentre 25 campioni sono completamente negativi ai risultati NAAT.

Rispetto alla NAAT, la sensibilità e la specificità dell'ELISA ultrasensibile sono rispettivamente del 98,3% e del 100% (Tabella 2). Dei 60 campioni di pazienti positivi alla dengue confermati dal NAAT, solo 1 campione è negativo nell'ELISA ultrasensibile. I dati NAAT hanno mostrato che il campione è un caso di infezione da DENV di tipo 4 con un valore CT di 21,59. I risultati dell'ELISA ultrasensibile sono in quasi perfetto accordo con i risultati NAAT, con un valore kappa di 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).

5. Conclusione

UIl metodo ELISA ltrasensitive è facile da eseguire e non richiede l'intervento di tirocinanti professionisti. TIl rilevamento può essere avviato immediatamente dopo aver ricevuto un piccolo campione.È particolarmente adatto per la diagnosi precoce diDenguemalattia inPaesi a basso reddito.

Riferimento

Chen, Po-Kai et al. "Metodo di rilevamento avanzato per la proteina NS1 della dengue utilizzando ELISA ultrasensibile con ciclo tio-NAD". Virus vol. 15,9 1894. 8 settembre 2023, doi:10.3390/v15091894

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