Un metodo scientifico per quantificare l'NMN in campioni biologici
1. Introduzione
Integrazione di nicotinamide mononucleotide (NMN) per aumentare il livello di nicotinammide, adenina dinucleotide (NAD+) è stato rivelato essere un promettente intervento anti-invecchiamento. Tuttavia, è ancora una seria sfida quantificare con precisione gli intermedi NAD+, NMN soprattutto. Questo studio ha lo scopo di introdurre un nuovo metodo, la doppia metodologia LC-MS/MS (DIMELC-MS/MS), per la quantificazione precisa di NMN in campioni biologici.
2. Fattori che influenzano l'accuratezza del rilevamento dell'NMN
L'NMN è difficile da rilevare con precisione a causa della sua vulnerabilità alla degradazione enzimatica, alla conversione nell'elaborazione dei campioni, ai suoi comportamenti complessi in diverse condizioni di colonna ed estrazione, nonché all'effetto matrice.
In particolare, l'NMN ha le proprietà di alta polarità e bassa volatilità, che è facile da sciogliere in acqua ma difficile da sciogliere in solventi organici. Queste proprietà limitano notevolmente l'applicazione di molti metodi di analisi quantitativa convenzionali.
Bcampioni teologici comeil sangue svolge attività significative di CD38 e CD73 (ecto-5’-nucleotidasi), entrambi i quali potrebbero utilizzare l'NMN come substrato.
Il comportamento dell'NMN nella colonna è molto complesso, probabilmente a causa della natura bipartita delle sue cariche, in modo che sottili differenze nelle condizioni di estrazione e della colonna influenzino significativamente il rilevamento affidabile e accurato dell'NMN.
3. Strategie di coping di dimeLC-MS/MSridurre l'impatto dei fattori di impatto
Per evitare l'interferenza dei fattori sopra menzionati, viene applicato un prototipo di colonna NMN-2. Questa colonna contiene particelle di silice ad alta purezza a base di C18 che sono più in grado di legare composti idrofili rispetto alle particelle di carbonio, migliorando la capacità di separazione.
L'acido perclorico (PCA) viene utilizzato in quanto è in grado di estrarre in modo efficiente NAD+ e NMN da campioni biologici come il plasma con perdite minime.
Per regolare gli effetti della matrice, una quantità fissa (1 μM) di ciascun composto isotopico viene aggiunta ai campioni biologici prima dell'estrazione con PCA.
4. Il vantaggiosdi dimeLC-MS/MS
I doppi standard isotopici NMN, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), nella metodologia LC-MS/MS-driven possono tracciare con precisione il destino dell'NMN durante l'elaborazione del campione, il che aumenta significativamente l'accuratezza e l'affidabilità della misurazione dell'NMN nei campioni biologici. Inoltre, dimeLC-MS/MS è in grado di valutare l'efficienza di estrazione e le concentrazioni assolute di NMN in diversi tipi di campioni biologici.
5. Conclusione
Esimoènuovo LC-MS/MS-con standard NMN a doppio isotopo è in grado di misurare in modo accurato e affidabile l'NMN nei campioni biologici.Può essere utilizzato per studi futuri sull'assunzione di NMN.
6. Riferimento
Unno, Junya et al. "Quantificazione assoluta del mononucleotide nicotinamide in campioni biologici mediante cromatografia liquida mediata da doppio isotopo-spettrometria di massa tandem (dimeLC-MS/MS)." npj invecchiamento vol. 10,1 2. 2 gennaio 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
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