Straordinari meriti dell'ELISA ultrasensibile con il ciclo tio-NAD nella determinazione della proteina Dengue NS1

1. Introduzione

La febbre dengue è una malattia infettiva acuta causata dal Virus della dengueattraverso la puntura di una zanzara infetta della specie Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus), con i principali sintomi come febbre alta, vertigini, mal di testa, eruzioni cutanee e Fortedolori (dolore agli occhi, ai muscoli, alle articolazioni o alle ossa), ecc. Questa malattia è ampiamente diffusa nei climi tropicali e subtropicali. Si stima che ogni anno vengano infettate da 100 a 400 milioni di persone, di cui oltre l'80% è solitamente lieve e asintomatico. Tuttavia, la febbre dengue grave può aumentare il rischio di morte se non trattata adeguatamente. Pertanto, la diagnosi precoce di questa malattia è importante per il suo trattamento tempestivo.

Degno di nota, la proteina 1 non strutturale (NS1), una glicoproteina altamente conservata, viene secreta principalmente durante l'infezione di Dengue virus, che è intensamente considerato il principale fattore di patogenesi Dengue. Pertanto, l'NSI è generalmente utilizzato come biomarcatore per la diagnosi precoce di questa malattia.

In questo studio, è stato condotto un test di immunoassorbimento enzimatico a sandwich(ELISA)in combinazione con il tio nicotinammide adenina dinucleotide (tio-NAD/S-NAD) metodo di ciclismo (di seguito denominato ELISA ultrasensibile) viene utilizzato per rilevare l'NSI, seguito dal confronto con NAAT per confermarne l'accuratezza del rilevamento.

2. Vantaggi e svantaggi dei metodi di rilevamento tradizionali per Dengue 

Attualmente, tDi seguito sono riportati quattro metodi di rilevamento principali per Dengue.


L'isolamento e l'identificazione virale hanno un'elevata specificità ma richiedono molto tempo, almeno 5 giorni. Il test rapido dell'antigene è il più veloce ed economico tra gli altri metodi, ma la sensibilità e la specificità sono relativamente basse. Il test sierologico basato su IgM e IgG è limitato dal numero di giorni di infezione, in quanto Le Il test deve essere ritardato fino a quando il livello di anticorpi non raggiunge un livello rilevabile.

In clinica, il NAAT viene spesso applicato per determinare Denguedallo sporco della sua elevata sensibilità e specificità. Tuttavia, questo metodo è costoso, laborioso e soggetto a falsi positivi, che devono essere condotti da personale addestrato. Per superare gli svantaggi di questi metodi, è stato introdotto un nuovo metodo di rilevamento l'ELISA ultrasensibile è applicato in questo studio.

3. Flusso di lavoro di ELISA ultrasensibile con ciclo tio-NAD

Una coppia di anticorpi èutilizzato per catturare la proteina NS1 nel sandwich ELISA e la fosfatasi alcalina èmarcato sull'anticorpo secondario. Oltre agli anticorpi, un derivato dell'androsterone, la 3α-idrossisteroide deidrogenasi, il tio-NAD e il NADH sonoutilizzato per costruire il sistema di ciclo enzimatico tio-NAD. Durante la reazione ciclica del tio-NAD, il tio-NADH si accumulava costantemente in un numero triangolare e poteva essere misurato direttamente ad una assorbanza di 405 nm.

4. Il confronto tra ELISA ultrasensibile e NAAT nella rilevazione della proteina Dengue NS1

Nella NAAT, 60 esemplari sono dengue-positivi e 25 sono dengue-negativi. Il valore della soglia di ciclo NAAT (CT) di quei campioni positivi alla dengue variava da 12,42 a 31,41. Nell'ELISA ultrasensibile, 59 campioni sono corrispondentemente positivi ai risultati NAAT, mentre 25 campioni sono completamente corrispondenti ai risultati NAAT.

Rispetto al NAAT, la sensibilità e la specificità dell'ELISA ultrasensibile sono rispettivamente del 98,3% e del 100% (Tabella 2). Dei 60 campioni di pazienti positivi alla dengue confermati dalla NAAT, solo 1 campione è negativo nell'ELISA ultrasensibile. I dati NAAT hanno mostrato che il campione è un caso di infezione da DENV di tipo 4 con un valore CT di 21,59. I risultati dell'ELISA ultrasensibile sono in quasi perfetto accordo con i risultati NAAT, con un valore kappa di 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).

5. Conclusione

Il metodo ELISA ultrasensibile è facile da eseguire e non richiede l'utilizzo di allievi professionisti. Il rilevamento può essere avviato immediatamente dopo aver ricevuto un piccolo campione. È particolarmente adatto per la diagnosi precoce della malattia dengue nei paesi a basso reddito.

Riferimento

Chen, Po-Kai et al. "Metodo di rilevamento avanzato per la proteina Dengue NS1 utilizzando ELISA ultrasensibile con ciclo tio-NAD". Virus, vol. 15,9, 1894. 8 settembre 2023, doi:10.3390/v15091894

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