Un metodo scientifico per quantificare il NMN in campioni biologici
1. Introduzione
Integrazione diMononucleotide di nicotinamide (NMN)per aumentare la regolazioneLivello diNicotinamide adenina Dinucleotide (NAD+)è stato presentato come un promettente intervento anti-invecchiamento. Tuttavia, è ancora una seria sfida per essere accuratamentequantificare gli intermedi NAD+, NMN In particolare. Questo studio è alimentato per introdurre un metodo innovativo, la metodologia LC-MS/MS a doppio isotopo mediata (dimeLC-MS/MS), per la quantificazione precisa diNMN nei campioni biologici.2. Fattori che influenzano la rilevazione accurata del NMN
La NMN è difficile da rilevare con precisione a causa della sua vulnerabilità agli enzimidegradazione, conversione nell'elaborazione del campione, i suoi comportamenti complessi in diverse condizioni di colonna e estrazione, nonché l'effetto matriciale.
In particolare, il NMN possiede le proprietà di alta polarità e bassa volatilità, che è facile da dissolvere in acqua ma difficile da dissolvere nei solventi organici. Queste proprietà limitano notevolmente l'applicazione di molti metodi convenzionali di analisi quantitativa.
BCampioni iologicicome il sangue porta attività significative di CD38 e CD73 (ecto-5’-nucleotidasi), entrambe potrebbero utilizzare NMN come substrato.
Il comportamento del NMN nella colonna è molto complesso, probabilmente a causa della natura bipartita delle sue cariche, tanto che differenze sottili nelle condizioni di estrazione e colonna influenzano significativamente la rilevazione affidabile e precisa del NMN.
3. Strategie di coping didimeLC-MS/MS per ridurre l'impatto dei fattori di impatto
Per evitare l'interferenza dei fattori sopra menzionati, un pRototipoColonnaNMN-2 viene applicato. Questa colonnaconteneres Particelle di silice ad alta purezza a base di C18 che sono più capaci di legare composti idrofili rispetto alle particelle di carbonio, migliorando la capacità di separazione.PAcido erclorico (PCA) è impiegato poiché può estrarre efficacemente NAD+ e NMN da campioni biologici come il plasma con minimi Perdite.
Per aggiustare gli effetti matriciali,a quantità fissa (1 μM) di ciascuna Composto isotopicois aggiunti abiologico campioni precedenti all'estrazione PCA.
4. Il vantaggios di dimeLC-MS/MS
Dstandard NMN isotopici di ouble, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), nella metodologia guidata da LC-MS/MS, possono tracciare con precisione il destino di NMN durante la lavorazione del campione, cheaumenta significativamente l'accuratezza e l'affidabilità della misurazione NMN nei campioni biologici. Inoltre, il dimeLC-MS/MS può valutare l'efficienza di estrazione e le concentrazioni assolute di NMN in diversi tipi di campioni biologici.
5. Conclusione
Thè nuovo LC-MS/MS-metodologia guidata con standard NMN doppi isotopi può accurately e Reliably misurare NMN in campioni biologici. Può essere utilizzato per studi futuri sull'assunzione di NMN.6. Riferimento
Non so, Junya et al. "Quantificazione assoluta del mononucleotide di nicotinamide in campioni biologici tramite cromatografia liquida a doppia isotopo - spettrometria di massa tandem (dimeLC-MS/MS)." NPJ AGING VOL. 10,1 2. 2 gennaio 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1Perché scegliereBONTAC?
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