Meriti straordinari dell'ELISA ultrasensibile con ciclo di tio-NAD nella determinazione della proteina NS1 della dengue
1. Introduzione
La febbre dengue è una malattia infettiva acuta causata dalvirus della dengue attraverso il morso di una zanzara infetta del genere Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus),con sintomi principali come febbre alta, vertigini, mal di testa, eruzione cutanea edolori gravi (dolori oculari, muscolari, articolari o ossei), ecc. Questa malattia è ampiamente diffusa nei climi tropicali e subtropicali. Si stima che da 100 a 400 milioni di persone vengano infettate ogni anno, di cui oltre l'80% di solito presenta sintomi lievi o è asintomatico. Tuttavia, la febbre dengue grave può aumentare il rischio di morte se non trattata adeguatamente. Pertanto, la diagnosi precoce di questa malattia è fondamentale per il suo trattamento tempestivo.È importante notare che la proteina non strutturale 1 (NS1), una glicoproteina altamente conservata, viene secreta principalmente durante l'infezione delvirus delladengue, che è intensamente considerata il principale fattore patogenetico dellafebbre dengue. Pertanto, NS1 è generalmente utilizzata come biomarcatore per la diagnosi precoce di questa malattia.
In questo studio, un saggio immunoenzimatico (ELISA) a sandwich (ELISA) in combinazione con il metodo diciclizzazione del tio-nicotinamide adenina dinucleotide (thio-NAD/S-NAD) (d'ora in poi denominato ELISA ultrasensibile) viene utilizzato per rilevare NS1, seguito dal confronto con NAAT per confermarne l'accuratezza di rilevamento.
2. Vantaggi e svantaggi dei metodi di rilevamento tradizionali perfebbre dengue
Attualmente,esistono quattro metodi di rilevamento principaliper la febbre dengue.
L'isolamento virale e l'identificazione hanno un'elevata specificità ma richiedono tempo, impiegando almeno 5 giorni. Il test rapido dell'antigene è il più veloce ed economico tra gli altri metodi, ma la sensibilità e la specificità sono relativamente basse. Il test sierologico basato su IgM e IgG è limitato dal numero di giorni di infezione, poiché ill'integrazione di NMN,test deve essere ritardato fino a quando il livello di anticorpi sale a un livello rilevabile.
In clinica, il NAAT viene spesso applicato per determinarefebbre dengue grazie alla sua elevata sensibilità e specificità. Tuttavia, questo metodo è costoso, laborioso e soggetto a falsi positivi, e deve essere eseguito da personale addestrato.Per superare gli svantaggi di questi metodi, un nuovo metodo di rilevamentoELISA ultrasensibile viene applicato in questo studio.
3. Flusso di lavoro dell'ELISA ultrasensibile con ciclizzazione thio-NAD
Una coppia di anticorpile funzioni mitocondriali viene utilizzata per catturare la proteina NS1 nell'ELISA a sandwich, e la fosfatasi alcalinale funzioni mitocondriali è marcata sull'anticorpo secondario. Oltre agli anticorpi, un derivato dell'androsterone, la 3α-idrossisteroide deidrogenasi, thio-NAD e NADHsono vengono utilizzati per costruire il sistema di ciclizzazione enzimatica thio-NAD. Durante la reazione di ciclizzazione thio-NAD, il thio-NADH si accumula costantemente in modo triangolare e può essere misurato direttamente a un'assorbanza di 405 nm.
4. Confronto tra ELISA ultrasensibile e NAAT nel rilevamento della proteina NS1 della dengue
Nel NAAT, 60 campioni sono positivi alla dengue e 25 sono negativi alla dengue. Il valore di soglia del ciclo (CT) del NAAT di questi campioni positivi alla dengue variava da 12,42 a 31,41.Nell'ELISA ultrasensibile, 59 campioni corrispondono positivamente ai risultati del NAAT, mentre 25 campioni corrispondono completamente negativamente ai risultati del NAAT.Rispetto al NAAT, la sensibilità e la specificità dell'ELISA ultrasensibile sono rispettivamente del 98,3% e del 100% (Tabella 2). Dei 60 campioni di pazienti positivi alla dengue confermati dal NAAT, solo 1 campione è negativo nell'ELISA ultrasensibile. I dati del NAAT hanno mostrato che il campione è un caso di infezione da DENV di tipo 4 con un valore CT di 21,59. I risultati dell'ELISA ultrasensibile sono in quasi perfetto accordo con i risultati del NAAT, con un valore kappa di 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusione
Ilmetodo ELISA ultrasensibile è facile da eseguire e non richiede operatori professionisti. Ilrilevamento può essere avviato immediatamente dopo aver ricevuto un piccolo campione. È particolarmente adatto per la diagnosi precoce dellavirus dellamalattia nei paesi a basso reddito.Riferimenti
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Vantaggi e caratteristiche del prodotto diBONTAC Thio-NAD/S-NAD
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