Vantaggi straordinari dell'ELISA ultrasensibile con il ciclo di tio-NAD nella determinazione della proteina NS1 della dengue
1. Introduzione
La dengue è una malattia infettiva acuta causata dalVirus della dengue attraverso il morso di una zanzara di una specie infetta di Aedes (Ae. aegypti o Ae. albopictus),con i principali sintomi come febbre alta, vertigini, mal di testa, eruzione cutana egrave Dolori (occhi, muscoli, articolazioni o ossa), ecc. Questa malattia è ampiamente diffusa nei climi tropicali e subtropicali. Si stima che ogni anno siano infettate da 100 a 400 milioni di persone, di cui oltre l'80% è solitamente lieve e asintomatica. Tuttavia, la dengue grave può aumentare il rischio di morte se non trattata correttamente. Pertanto, una diagnosi precoce di questa malattia è fondamentale per il suo trattamento tempestivo.Degno di nota che la proteina non strutturale 1 (NS1), una glicoproteina altamente conservata, viene principalmente secreta durante l'infezione diDengueVirus, che è intensamente considerato il principale fattore di patogenesi diDengue. Pertanto, l'INS viene generalmente utilizzato come biomarcatore per la diagnosi precoce di questa malattia.
In questo studio, un saggio immunoenzimatico collegato a sandwich (ELISA) in combinazione con ilTionicotinamide adenina Dinucleotide (tio-NAD/S-NAD)Metodo di ciclaggio (d'ora in poi chiamata ELISA ultrasensibile) viene utilizzato per rilevare l'NSI, seguito dal confronto con il NAAT per confermarne l'accuratezza di rilevamento.
2. Vantaggi e svantaggi dei metodi di rilevamento tradizionali perDengue
Attualmente, tEcco quattro principali metodi di rilevamentoper Dengue.
Isolamento virale e l'identificazione hanno un'alta specificità ma richiedono tempo, richiedendo almeno 5 giorni. Il Antigene rapido Il test è il più veloce ed economico tra gli altri metodi, ma la sensibilità e la specificità sono relativamente basse. Il test sierologico basato su IgM e IgG è limitato da il numero di giorni di infezione, comeilIl test deve essere ritardato fino al livello degli anticorpi raggiunge un livello rilevabile.
In clinica, spesso viene applicato il NAAT per determinareDengue dalla sporcizia per la sua alta sensibilità e specificità. Tuttavia, questo metodo è costoso, laborioso e soggetto a falsi positivi, che deve essere eseguito dal personale addestrato.Per superare gli svantaggi di questi metodi, è stato adottato un nuovo metodo di rilevamentoELISA ultrasensibile è Ho fatto domanda in questo studio.
3. Flusso di lavoro dell'ELISA ultrasensibile con ciclo thio-NAD
Una coppia di anticorpiè usata per catturare la proteina NS1 nel sandwich ELISA e la fosfatasi alcalinaè marcato sull'anticorpo secondario. Oltre agli anticorpi, un derivato androsterone, 3α-idrossisteroide deidrogenasi, tio-NAD e NADHsono utilizzato per costruire il sistema di ciclaggio enzimatico tio-NAD. Durante la reazione di ciclo tio-NAD, la tio-NADH si accumula costantemente in forma numerica triangolare e può essere misurata direttamente a un'assorbenza di 405 nm.
4. Il confronto tra ELISA ultrasensibile e NAAT nella rilevazione della Proteina NS1 della Dengue
Nel NAAT, 60 campioni sono positivi alla dengue e 25 sono negativi alla dengue. Il valore della soglia di ciclo (CT) NAAT di quei campioni positivi alla dengue variava da 12,42 a 31,41.Nell'ELISA ultrasensibile, 59 campioni sono corrispondentemente positivi ai risultati NAAT, mentre 25 campioni sono completamente negativi ai risultati NAAT.Rispetto al NAAT, la sensibilità e la specificità dell'ELISA ultrasensibile sono rispettivamente del 98,3% e del 100% (Tabella 2). Dei 60 campioni di pazienti positivi alla dengue confermati per NAAT, solo 1 è negativo nell'ELISA ultrasensibile. I dati NAAT hanno mostrato che il campione è un caso di infezione da DENV di tipo 4 con un valore CT di 21,59. I risultati dell'ELISA ultrasensibile sono quasi in perfetto accordo con quelli del NAAT, con un valore kappa di 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusione
UIl metodo ELISA Itrasensitive è facile da eseguire e non richiede allievi professionisti per essere operato. TLa rilevazione può essere avviata immediatamente dopo aver ricevuto un piccolo campione. È particolarmente adatto per la rilevazione precoce diDenguemalattia in Paesi a basso reddito.Riferimento
Chen, Po-Kai et al. "Metodo avanzato di rilevamento della proteina NS1 della dengue utilizzando ELISA ultrasensibile con ciclo di tio-NAD." Virus, vol. 15,9, 1894. 8 settembre 2023, doi:10.3390/v15091894Vantaggi del prodotto e caratteristiche diBONTAC Thio-NAD/S-NAD
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